第200章 35%（感谢牛津面的盟主！）（1 / 5）
第200章 35%（感谢牛津面的盟主！）
学校的实验室条件没那么好。
空调老化，地方不大，房间里人也有点多。
条件算是艰苦吧，大家却一点不觉得累，一个个热血沸腾的，就想着快点把这个项目做出来。
陈浩上次这么有动力的时候还是在大二夏天，跟老江去参加网吧举办的cs1.6网吧赛。
时过境迁。
曾经的m4网瘾少年，现在已经变成使用移液枪的高手了。
蔡卓群将无酶水吸出，打入离心管底部，反复吹打。
王晓晴观察片刻后说：“测一下吧。”
蔡卓群点点头，拔下枪头，拿着样本走到nanodrop分光光度计前。
用移液枪吸取了1微升样本，滴在检测基座上，放下检测臂，在连接的旧台式电脑上点击了测量。
屏幕上很快跳出了数据。
陆晓林停下了手里的活，转头问道：“多少？”
蔡卓群：“浓度12ng/ul，a260/280比值是1.32，a260/230比值是0.7。”
王晓晴盯着屏幕看了一会儿，有点无奈：“这已经是第四批废样了……”
项目的难度远远超出除江河外所有人的预期。
虽然之前江河用加入dmso的方法，解决了pcr扩增阶段引物二聚体的问题。
但解决了一个问题，接下来还会出现更多的问题……
现在的瓶颈，卡在了提取上。
mirna在血液中的含量极低，且非常容易被血液中的rna酶降解。
纯度不够。
a260/280的比值正常应该在1.8到2.0之间，低于1.8就意味着样本中存在大量的蛋白质污染。
而a260/230比值只有0.7，更是说明里面混了大量的酚类物质或者盐离子。
用这种样本去做下一步的逆转录，杂质会让逆转录酶失活，后面的pcr扩增根本跑不出真实数据。
蔡卓群试图寻找原因：“王教授，是不是氯仿的用量不够？我们在取上清液的时候，可能还是带入了一些中间层的蛋白质。”
王晓晴摇摇头：“上一批我们已经把氯仿的比例提高了百分之二十，离心时间也延长了五分钟，纯度是稍微好了一点，但是浓度直接掉到了5ng/ul以下。”
陆晓林在一旁分析：“血清里全是蛋白，游离的核酸少，trizol提取法，用在血清上，天生就有缺陷。”
实验室众人，陷入沉默。
其实在后世，有专门针对血清的柱提法商业试剂盒，傻瓜式操作，半个小时就能得到高纯度的mirna。
但在08年，专门针对液体活检的试剂盒在国内根本买不到，就算买到了技术也还远未成熟，所以只能用最基础的化学试剂，手工一步步去抠。 ↑返回顶部↑
学校的实验室条件没那么好。
空调老化，地方不大，房间里人也有点多。
条件算是艰苦吧，大家却一点不觉得累，一个个热血沸腾的，就想着快点把这个项目做出来。
陈浩上次这么有动力的时候还是在大二夏天，跟老江去参加网吧举办的cs1.6网吧赛。
时过境迁。
曾经的m4网瘾少年，现在已经变成使用移液枪的高手了。
蔡卓群将无酶水吸出，打入离心管底部，反复吹打。
王晓晴观察片刻后说：“测一下吧。”
蔡卓群点点头，拔下枪头，拿着样本走到nanodrop分光光度计前。
用移液枪吸取了1微升样本，滴在检测基座上，放下检测臂，在连接的旧台式电脑上点击了测量。
屏幕上很快跳出了数据。
陆晓林停下了手里的活，转头问道：“多少？”
蔡卓群：“浓度12ng/ul，a260/280比值是1.32，a260/230比值是0.7。”
王晓晴盯着屏幕看了一会儿，有点无奈：“这已经是第四批废样了……”
项目的难度远远超出除江河外所有人的预期。
虽然之前江河用加入dmso的方法，解决了pcr扩增阶段引物二聚体的问题。
但解决了一个问题，接下来还会出现更多的问题……
现在的瓶颈，卡在了提取上。
mirna在血液中的含量极低，且非常容易被血液中的rna酶降解。
纯度不够。
a260/280的比值正常应该在1.8到2.0之间，低于1.8就意味着样本中存在大量的蛋白质污染。
而a260/230比值只有0.7，更是说明里面混了大量的酚类物质或者盐离子。
用这种样本去做下一步的逆转录，杂质会让逆转录酶失活，后面的pcr扩增根本跑不出真实数据。
蔡卓群试图寻找原因：“王教授，是不是氯仿的用量不够？我们在取上清液的时候，可能还是带入了一些中间层的蛋白质。”
王晓晴摇摇头：“上一批我们已经把氯仿的比例提高了百分之二十，离心时间也延长了五分钟，纯度是稍微好了一点，但是浓度直接掉到了5ng/ul以下。”
陆晓林在一旁分析：“血清里全是蛋白，游离的核酸少，trizol提取法，用在血清上，天生就有缺陷。”
实验室众人，陷入沉默。
其实在后世，有专门针对血清的柱提法商业试剂盒，傻瓜式操作，半个小时就能得到高纯度的mirna。
但在08年，专门针对液体活检的试剂盒在国内根本买不到，就算买到了技术也还远未成熟，所以只能用最基础的化学试剂，手工一步步去抠。 ↑返回顶部↑